Produkty

Proteín ORF45 herpesvírusu spojeného s Kaposiho sarkómom (KSHV) je gamaherpesvírusový špecifický proteín bezprostredne skorého tegumentu.Naše predchádzajúce štúdie odhalili jeho kľúčové úlohy v skorých aj neskorých štádiách infekcie KSHV.V tejto štúdii sme skúmali interakciu ORF45 pomocou panelu monoklonálnych protilátok.Okrem predtým identifikovaných proteínov extracelulárnej regulovanej kinázy (ERK) a p90 ribozomálnej S6 kinázy (RSK) sme našli niekoľko ďalších spoločne purifikovaných proteínov, vrátane prominentných proteínov s veľkosťou ~ 38 kDa a ~ 130 kDa.Hmotnostná spektrometria odhalila, že 38-kDa proteín je vírusový ORF33 a 130-kDa proteín je bunkový USP7 (ubikvitín-špecifická proteáza 7).Mapovali sme doménu viažucu ORF33 na vysoko konzervovaných 19 aminokyselín s karboxylovým koncom (aa) ORF45 a doménu viažucu USP7 na uvedený konsenzus motív v centrálnej oblasti ORF45.Pomocou imunofluorescenčného farbenia sme pozorovali kolokalizáciu ORF45 s ORF33 alebo USP7 v podmienkach transfekcie aj v bunkách infikovaných KSHV.Okrem toho sme si všimli relokalizáciu časti ORF33 / USP7 závislú od ORF45 z jadra do cytoplazmy.Zistili sme, že ORF45 spôsobil zvýšenie akumulácie proteínu ORF33, ktoré bolo zrušené, ak bola deletovaná buď doména viažuca ORF33 alebo USP7 v ORF45.Okrem toho delécia konzervovaného karboxylového konca ORF45 v genóme KSHV drasticky znížila hladinu proteínu ORF33 v bunkách infikovaných KSHV a zrušila produkciu viriónov potomstva.Súhrnne naše výsledky nielenže odhaľujú nové zložky interaktómu ORF45, ale tiež demonštrujú, že interakcie medzi týmito proteínmi sú kľúčové pre lytickú replikáciu KSHV. Kaposiho sarkóm-asociovaný herpesvírus (KSHV) je pôvodcom niekoľkých ľudských rakovín.KSHV ORF45 je multifunkčný proteín, ktorý je potrebný na lytickú replikáciu KSHV, ale presné mechanizmy, ktorými ORF45 vykonáva svoje kritické funkcie, nie sú jasné.Naše predchádzajúce štúdie odhalili, že všetok proteín ORF45 v bunkách existuje v komplexoch s vysokou molekulovou hmotnosťou.Preto sme sa snažili charakterizovať interaktóm ORF45, aby sme poskytli prehľad o jeho úlohách počas lytickej replikácie.Pomocou panelu monoklonálnych protilátok sme skúmali interaktóm ORF45 v bunkách infikovaných KSHV.Identifikovali sme dvoch nových väzbových partnerov ORF45: vírusový proteín ORF33 a bunkovú ubikvitín-špecifickú proteázu 7 (USP7).Ďalej demonštrujeme, že interakcia medzi ORF45 a ORF33 je rozhodujúca pre účinnú produkciu vírusových častíc KSHV, čo naznačuje, že cielená interferencia s touto interakciou môže predstavovať novú stratégiu na inhibíciu lytickej replikácie KSHV.