Produkty

Monogalaktopyranozidy fluoresceínu a metylester fluoresceínu: syntéza, enzymatická hydrolýza biotnylovanou β-galaktozidázou a stanovenie translačného difúzneho koeficientu

Fluoresceínové monoglykozidy (d-galaktopyranozid (FMG) a d-glukopyranozid) a ich metylester (MFMG) boli pripravené z acetobrómglukózy/galaktózy a metylesteru fluoresceínu v dobrých výťažkoch.Uskutočnili sa experimenty enzymatickej hydrolýzy (s použitím biotinylovanej β-galaktozidázy) galaktoderivátov a vypočítali sa kinetické parametre.Počas hydrolýzy sa pozorovalo 15- až 20-násobné zvýšenie intenzity fluorescencie.V krátkom čase a nízkej koncentrácii substrátu bol zaznamenaný lineárny nárast fluorescencie, vďaka čomu sú tieto zlúčeniny užitočnými a citlivými sondami pre galaktozidázy.Veľkosť Michaelis-Mentenovej konštanty (Km) pre MFMG je vyššia ako hodnota FMG, čo naznačuje možnú konformačnú zmenu fluorogénneho substrátu.Hodnota Km pre biotinylovaný β-Gal s FMG je nižšia ako hodnota pre natívny enzým.Toto pozorovanie ukazuje vyššiu substrátovú afinitu biotinylovaného enzýmu v porovnaní s prirodzeným enzýmom.Translačné difúzne koeficienty sa merali pre fluorogénne substráty a oba produkty pomocou fluorescenčnej korelačnej spektroskopie.Translačné difúzne koeficienty pre fluorogénne substráty a produkty enzymatickej hydrolýzy boli namerané ako podobné, v rozsahu 3,5–4,5 × 10–10 m2 s-1.Zvýšenie alebo spomalenie enzymatickej kinetiky v dôsledku rozdielu v translačnej pohyblivosti substrátu a produktu teda nie je také zrejmé.