Produkty

Jedným z faktorov brániacich klinickej aplikácii regeneratívnej medicíny pri degeneratívnych ochoreniach chrupaviek je vhodný zdroj buniek.Chondrocyty, jediný bunkový typ chrupavky, pestované in vitro v kultivačných podmienkach, aby sa zvýšil počet buniek, strácajú svoj fenotyp spolu so schopnosťou vytvárať hyalínne chrupavkové tkanivo.V tejto štúdii sme určili, že trojrozmerný (3D) kultivačný systém bez séra a rastových faktorov obnovuje schopnosť pasážovaných chondrocytov tvoriť chrupavkové tkanivo in vitro, čo je proces, ktorý zahŕňa sox9. Bovinné kĺbové chondrocyty boli pasážované dvakrát do umožňujú rozšírenie počtu buniek (P2) a kultivujú sa pri vysokej hustote na 3D membránach potiahnutých kolagénom typu II v médiu s vysokým obsahom glukózy doplnenom inzulínom a dexametazónom (SF3D).Bunky boli charakterizované po expanzii monovrstvy a následnej 3D kultivácii prietokovou cytometriou, génovou expresiou a histológiou.Boli charakterizované skoré zmeny v signálnych transdukčných dráhach počas rediferencovania iónu. Bunky P2 vykazovali progenitorový antigénový profil 99 % CD44(+) a 40 % CD105(+) a profil génovej expresie naznačujúci interzónové bunky.P2 v SF3D exprimoval chondrogénne gény a akumuloval extracelulárnu matricu.Downregulácia inzulínového receptora (IR) pomocou HNMPA-(AM3) alebo PI-3/AKT kinázovej dráhy (aktivovanej liečbou inzulínom) pomocou Wortmanninu inhibovala syntézu kolagénu.HNMPA-(AM3) znížil expresiu génov Col2, Col11 a IR, ako aj Sox6 a -9.Koimunoprecipitačné a chromatínové imunoprecipitačné analýzy buniek ošetrených HNMPA-(AM3) ukázali väzbu koaktivátorov Sox6 a Med12 so Sox9, ale znížili väzbu Sox9-Col2a1. Opisujeme nový kultivačný spôsob, ktorý umožňuje zvýšenie počtu chondrocytov a podporuje tvorba hyalínového chrupavkového tkaniva čiastočne väzbou Sox9-Col2a1 sprostredkovanou inzulínom.Vhodnosť tkaniva vytvoreného týmto prístupom na použitie pri oprave kĺbov je potrebné preskúmať in vivo.