Produkty

LecA (PA-IL) je cytotoxický lektín a adhezín produkovaný Pseudomonas aeruginosa, ktorý viaže hydrofóbne galaktozidy s vysokou špecifickosťou a afinitou.Použitím translačnej fúzie lecA-egfp a imunoblotovej analýzy extracelulárnej matrice biofilmu ukazujeme, že lecA je exprimovaný v bunkách pestovaných na biofilme.V statických testoch biofilmu na polystyréne aj nehrdzavejúcej oceli sa hĺbka biofilmu a pokrytie povrchu znížili mutáciou lecA a zvýšili sa v kmeni PAO-P47 nadmerne produkujúcom LecA.Pokrytie povrchu biofilmom rodičovským kmeňom PAO-P47, ale nie mutantom lecA na oceľových kupónoch, bolo tiež inhibované rastom v prítomnosti buď izopropyl-beta-D-tiogalaktozidu (IPTG) alebo p-nitrofenyl-alfa-D-galaktozidu ( NPG).Okrem toho by sa zrelé biofilmy divokého typu vytvorené v neprítomnosti týchto hydrofóbnych galaktozidov mohli dispergovať pridaním IPTG.Na rozdiel od toho, pridanie p-nitrofenyl-alfa-L-fukózy (NPF), ktorá má vysokú afinitu k lektínu P. aeruginosa LecB (PA-IIL), nemalo žiadny vplyv na tvorbu biofilmu alebo disperziu.Planktonický rast P. aeruginosa PAO1 nebol ovplyvnený prítomnosťou IPTG, NPG alebo NPF, ani kmeň nebol schopný využiť tieto cukry ako zdroje uhlíka, čo naznačuje, že pozorované účinky na tvorbu biofilmu boli spôsobené kompetitívnou inhibíciou LecA-ligandu. viazanie.Podobné výsledky sa získali aj pre biofilmy pestované v podmienkach dynamického toku na oceľových kupónoch, čo naznačuje, že LecA prispieva k architektúre biofilmu P. aeruginosa v rôznych podmienkach prostredia.

V listoch rastlín Arabidopsis bola detegovaná alfa-L-fukozidáza (EC 3.2.1.51) schopná uvoľniť t-fukozylový zvyšok z bočného reťazca xyloglukánových oligosacharidov.Okrem toho sa z listov kapusty (Brassica oleracea) purifikovala alfa-L-fukozidáza s podobnou substrátovou špecifickosťou, aby sa vytvoril jediný pás na SDS-PAGE.Z tohto proteínového pásu sa získali dve peptidové sekvencie a použili sa na identifikáciu génu Arabidopsis kódujúceho alfa-fukozidázu, ktorú navrhujeme nazvať AtFXG1.Okrem toho sa našiel aj gén Arabidopsis s homológiou so známymi alfa-L-fukozidázami a navrhli sme ho pomenovať ako AtFUC1.AtFXG1 aj ATFUC1 boli heterológne exprimované v bunkách Pichia pastoris a aktivity alfa-L-fukozidázy sa vylučovali do kultivačného média.Alfa-L-fukozidáza kódovaná AtFXG1 bola účinná proti oligosacharidom z xyloglukánu XXFG, ako aj proti 2'-fukozyl-laktitolu, ale nie proti p-nitrofenyl-alfa-L-fukopyranozidu.Heterológne exprimovaný AtFUC1 bol však aktívny iba proti 2'-fukozyl-laktitolu.Prvý z nich teda musí súvisieť s metabolizmom xyloglukánu.