Produkty

Jadrová akumulácia mutantnej formy jadrového proteínu Lamin-A, nazývaného Progerín (PG) alebo Lamin AΔ50, sa vyskytuje pri Hutchinson-Gilfordovom syndróme progérie (HGPS) alebo progérii, čo je ochorenie zrýchleného starnutia.Jedným z hlavných symptómov tejto genetickej poruchy je strata podkožného tuku v dôsledku dramatickej lipodystrofie. Stabilne sme indukovali expresiu ľudského PG a GFP - zeleného fluorescenčného proteínu - ako kontrolu v bunkách 3T3L1 pomocou lentivírusového systému na štúdium vplyv expresie PG v diferenciačnej kapacite tejto bunkovej línie, jedného z najpoužívanejších adipogénnych modelov.Na štúdium účinku akumulácie PG sa uskutočnila kvantitatívna proteomika (iTRAQ).Niekoľko modulovaných proteínov bolo overených imunoblotovaním a PCR v reálnom čase.Mitochondriálna funkcia bola analyzovaná meraním a) mitochondriálnej bazálnej aktivity, b) produkcie superoxidových aniónov a c) individuálnej účinnosti rôznych komplexov dýchacieho reťazca. Zistili sme, že nadmerná expresia PG dodávaním lentivirálneho génu vedie k zníženie rýchlosti proliferácie a defektov adipogénnej kapacity v porovnaní s kontrolou.Kvantitatívna proteomická analýza ukázala 181 proteínov významne (p<0,05) modulovaných v preadipocytoch exprimujúcich PG.Mitochondriálna funkcia je narušená v bunkách exprimujúcich PG.Konkrétne sme zistili zvýšenie aktivity komplexu I a nadprodukciu superoxidového aniónu.Inkubácia s činidlami zachytávajúcimi reaktívne druhy kyslíka (ROS) vedie k zníženiu autofagickej proteolýzy, ako sa ukázalo pomerom LC3-II/LC3-I. Expresia PG v bunkách 3T3L1 podporuje zmeny v niekoľkých biologických procesoch, vrátane štruktúry cytoskeletu, metabolizmu lipidov, vápnika regulácia, translácia, skladanie proteínov a tvorba energie mitochondriami.Naše údaje posilňujú príspevok akumulácie ROS k fenotypu predčasného starnutia a vytvárajú spojenie medzi mitochondriálnou dysfunkciou a stratou proteostázy v HGPS.