Produkty

Beta-D-2'-deoxy-2'-fluór-2'-C-metylcytidín (PSI-6130) je účinný špecifický inhibítor syntézy RNA vírusu hepatitídy C (HCV) v replikónových bunkách Huh-7.Na inhibíciu HCV NS5B RNA polymerázy musí byť PSI-6130 fosforylovaný na 5'-trifosfátovú formu.Skúmala sa fosforylácia PSI-6130 a inhibícia HCV NS5B.Fosforylácia PSI-6130 rekombinantnou ľudskou 2'-deoxycytidínkinázou (dCK) a uridín-cytidínkinázou 1 (UCK-1) sa merala pomocou spojenej spektrofotometrickej reakcie.Ukázalo sa, že PSI-6130 je substrát pre purifikovaný dCK s Km 81 mikroM a kcat 0,007 s-1, ale nebol substrátom pre UCK-1.Monofosfát PSI-6130 (PSI-6130-MP) bol účinne fosforylovaný na difosfát a následne na trifosfát pomocou rekombinantnej ľudskej UMP-CMP kinázy a nukleoziddifosfátkinázy, v danom poradí.Študovala sa inhibícia štandardných a mutovaných (S282T) HCV NS5B RNA polymeráz.Inhibičná konštanta v ustálenom stave (Ki) pre PSI-6130 trifosfát (PSI-6130-TP) s enzýmom divokého typu bola 4,3 uM.Podobné výsledky sa získali s 2'-C-metyladenozíntrifosfátom (Ki=1,5 mikroM) a 2'-C-metylcytidíntrifosfátom (Ki=1,6 mikroM).NS5B s mutáciou S282T, o ktorej je známe, že prepožičiava rezistenciu na 2'-C-metyladenozín, bol inhibovaný PSI-6130-TP rovnako účinne ako divoký typ.Inkorporácia PSI-6130-MP do RNA katalyzovaná purifikovanou NS5B RNA polymerázou viedla k ukončeniu reťazca.