Produkty

Oxidačné poškodenie báz DNA zvyčajne vedie k tvorbe oxidovaných purínov, najmä 7,8-dihydro-8-oxoguanínu (8-oxoG) a 7,8-dihydro-8-oxoadenínu (8-oxoA), pričom prvý z nich je dobre známa mutagénna lézia.Pretože 8-oxoG v porovnaní s normálnymi bázami ľahko podlieha ďalšej oxidácii, in vitro sa skúmala inzercia bázy počas syntézy DNA oproti oxidovanej forme 8-oxoG.Syntetický templát obsahujúci jednu 8-oxoG léziu bol najprv ošetrený rôznymi jednoelektrónovými oxidantmi alebo za podmienok singletového kyslíka a potom podrobený predlžovaniu priméru katalyzovaného Klenowovým fragmentom exo- (Kf exo-), DNA polymerázou alfa teľacieho týmusu (pol alfa ) alebo ľudská DNA polymeráza beta (pol beta).V súlade s predchádzajúcimi správami sú dAMP a dCMP vložené selektívne oproti 8-oxoG so všetkými tromi DNA polymerázami.Je zaujímavé, že sa zistilo, že oxidácia 8-oxoG indukuje inzerciu dAMP a dGMP oproti lézii pomocou Kf exo- s prechodnou inhibíciou predlžovania priméru, ktorá sa vyskytuje v mieste modifikovanej bázy.Okrem toho lézia predstavuje blok počas syntézy DNA prostredníctvom pol alfa a pol beta.Experimenty s templátovým oligonukleotidom modifikovaným 8-oxoA ukazujú, že 8-oxoA aj oxidovaná forma 8-oxoA priamo vkladajú dTMP pomocou Kf exo-.Hmotnostná spektrometrická analýza oligonukleotidov obsahujúcich 8-oxoG pred a po oxidácii IrCl62 je konzistentná s oxidáciou primárne 8-oxoG miesta, čo vedie k vytvoreniu guanidinohydantoínovej skupiny ako hlavného produktu.Nezískal sa žiadny dôkaz o tvorbe abázických miest.Tieto výsledky ukazujú, že oxidovaná forma 8-oxoG, pravdepodobne guanidinohydantoín, môže viesť k nesprávnemu čítaniu a nesprávnemu vloženiu dNTP počas syntézy DNA.Ak by k takémuto procesu došlo in vivo, predstavovalo by to bodovú mutagénnu léziu vedúcu k G->T a G-->C transverziám.Zodpovedajúca oxidovaná forma 8-oxoA však primárne vykazuje správnu inzerciu T počas syntézy DNA s Kf exo-.