Produkty

Účinky detergentov na aktivitu P-glykoproteínovej atpázy: rozdiely v poruchách bazálnych a verapamil závislých aktivít.

P-glykoproteín (P-gp), glykoproteín plazmatickej membrány spojený s fenotypom mnohopočetnej liekovej rezistencie, je zodpovedný za ATP-dependentný eflux rôznych amfifilných liečiv.Pomocou membránových vezikúl pripravených z bunkovej línie DC-3F/ADX rezistentnej voči viacerým liečivám sme študovali poruchu bazálnych (tj v neprítomnosti liečiva) a verapamil-dependentných P-gp ATPázových aktivít indukovaných rôznymi detergentmi pri nesolubilizácii, ako aj pri solubilizačných koncentráciách.Progresívna membránová solubilizácia so zvyšujúcou sa koncentráciou detergentu bola monitorovaná rozptylom svetla a centrifugačnými experimentmi.Pre koncentrácie nerozpustných detergentov všetky testované detergenty okrem DOC indukovali čiastočnú inhibíciu aktivity P-gp ATPázy, ktorá nekorelovala s množstvom rôznych testovaných detergentov začlenených do membrán.Analýza aktivácie P-gp indukovanej verapamilom ukazuje, že aktivita P-gp ATPázy je odlišne modulovaná rôznymi detergentmi v nesolubilizačných koncentráciách.Je teda pravdepodobnejšie, že sa vyskytnú špecifické interakcie medzi P-gp a detergentmi, a nie globálna porucha membrány.Po solubilizácii rôznymi testovanými detergentmi bola bazálna aktivita P-gp ATPázy prakticky úplne inhibovaná, s výnimkou prítomnosti CHAPS, ktorý bol schopný zachovať túto aktivitu na úrovni porovnateľnej s hladinou nameranou v natívnych membránach.Aktivácia P-gp ATPázy indukovaná verapamilom sa však stratila počas solubilizácie P-gp pomocou CHAPS, ale obnovila sa po zriedení CHAPS pod kritickú micelárnu koncentráciu.Tieto pozorovania naznačujú špecifické interakcie medzi molekulami P-gp a CHAPS v rámci zmiešaných micel.Celkovo sú naše údaje preukazujúce špecifické interakcie P-gp/detergenty v súlade s umiestnením miest transportu liečiva na transmembránových doménach P-gp.