Produkty

Proteínová fosforylácia reguluje rôzne bunkové funkcie a hrá kľúčovú úlohu v ranom vývoji rastlín.Na doplnenie a rozšírenie predchádzajúcich výskumov fosforylácie proteínov v semenákoch Arabidopsis sme použili alternatívny prístup, ktorý kombinuje extrakciu proteínov za nedenaturujúcich podmienok s imobilizovanou afinitnou chromatografiou na kovoch (IMAC) obohatením o intaktné fosfoproteíny v extraktoch ochudobnených o Rubisco, po čom nasleduje identifikácia. použitím dvojrozmernej gélovej elektroforézy (2-DE) a kvapalinovej chromatografie-tandemovej hmotnostnej spektrometrie (LC-MS/MS).Digescia trypsínom v géli a analýza vybraných gélových škvŕn identifikovala 144 fosforylovaných peptidov a zvyškov, z ktorých len 18 fosfopeptidov a 8 fosfozitov sa našlo v databázach fosforylačných miest PhosPhAt 4.0 a P3DB Arabidopsis thaliana.Viac ako polovica z 82 identifikovaných fosfoproteínov sa podieľala na metabolizme uhľohydrátov, fotosyntéze / dýchaní alebo mechanizme reakcie na oxidačný stres.Zdá sa, že obohatenie intaktných fosfoproteínov pred 2-DE a LC-MS/MS zlepšuje detekciu fosforylovaných treonínových a tyrozínových zvyškov v porovnaní s metódami, ktoré využívajú obohatenie na úrovni peptidov, čo naznačuje, že tieto dva prístupy sa trochu dopĺňajú z hľadiska pokrytia miesta fosforylácie.Porovnanie výsledkov pre mladé sadenice s výsledkami získanými skôr pre zrelé listy Arabidopsis identifikovalo päť proteínov, ktoré sú v týchto tkanivách rozdielne fosforylované, čo demonštruje potenciál tejto techniky na skúmanie dynamiky fosforylácie proteínov počas vývoja rastlín.