Produkty

Lepšie využitie dusíka u hovädzieho dobytka je dôležité na zabezpečenie udržateľnej produkcie dobytka.Keďže puríny a pyrimidíny (PP) tvoria významnú časť dusíka v bachore, je nevyhnutné lepšie porozumieť absorpcii a intermediárnemu metabolizmu PP.Táto práca popisuje vývoj a validáciu citlivej a špecifickej metódy na simultánne stanovenie 20 purínov (adenín, guanín, guanozín, inozín, 2'-deoxyguanozín, 2'-deoxyinozín, xantín, hypoxantín), pyrimidínov (cytozín, tymín, uracil, cytidín, uridín, tymidín, 2'-deoxyuridín) a produkty ich degradácie (kyselina močová, alantoín, β-alanín, kyselina β-ureidopropiónová, kyselina β-aminoizomaslová) v krvnej plazme dojníc.Technika na báze vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie spojená s elektrosprejovou ionizačnou tandemovou hmotnostnou spektrometriou (LC-MS/MS) bola kombinovaná s individuálnymi kalibračnými štandardmi prispôsobenými matrici a stabilnými izotopovo značenými referenčnými zlúčeninami.Kvantitatívnej analýze predchádzal nový postup predúpravy pozostávajúci zo zrážania etanolom, filtrácie, odparovania a rekonštitúcie.Skúmali sa parametre separácie a detekcie počas LC-MS/MS analýzy.Potvrdilo sa, že použitie logaritmického kalibračného modelu skôr ako lineárneho kalibračného modelu viedlo k nižším CV% a nedostatok testu zhody preukázal uspokojivú lineárnu regresiu.Metóda pokrýva rozsahy koncentrácií pre každý metabolit podľa skutočných vzoriek, napr. guanín: 0,10 – 5,0 μmol/l a alantoín: 120 – 500 μmol/l.CV% pre zvolené kvantifikačné rozsahy boli nižšie ako 25%.Metóda má dobrú opakovateľnosť (CV%≤25%) a strednú presnosť (CV%≤25%) a vynikajúce výťažnosti (91-107%).Všetky metabolity vykazovali dobrú dlhodobú stabilitu a dobrú stabilitu v rámci cyklov (CV % ≤ 10 %).V plazme, moči a mlieku boli pozorované rôzne stupne absolútneho účinku na matricu.Stanovením relatívnych účinkov matrice sa zistilo, že metóda bola vhodná pre takmer všetky skúmané metabolity PP v plazme odobratej z tepny a portálnej pečeňovej, pečeňovej a gastrosplenické žily a až na niekoľko výnimiek aj pre iné druhy ako kurčatá, ošípané, norok, človek a potkan.