Produkty

V progresii Gravesovej orbitopatie (GO) bola preukázaná diferenciácia orbitálnych fibroblastov na zrelé adipocyty a následná akumulácia tukového tkaniva.Autofágia sa podieľa na adipogenéze, ale málo je známe o úlohe autofágie pri iniciácii a progresii GO.Cieľom tejto štúdie je preskúmať úlohu autofágie v patogenéze GO. Analyzovali sa explantáty orbitálneho tukového/spojivového tkaniva od pacientov s GO a od normálnych jedincov, ako aj izolované orbitálne fibroblasty.Adipogenéza bola indukovaná pomocou diferenciačného média s peroxidom vodíka alebo bez neho a autofágia bola manipulovaná pomocou bafilomycínu A1 a krátkej vlásenkovej RNA (shRNA) zacielenej na Atg5.Autofagozómy boli identifikované elektrónovou mikroskopiou.Expresia génov súvisiacich s autofágiou a transkripčných faktorov súvisiacich s adipogenézou sa analyzovala reverznou transkripčno-polymerázovou reťazovou reakciou v reálnom čase a/alebo analýzou Western blot.Akumulácia lipidových kvapiek sa skúmala farbením Oil Red O. Autofagické vakuoly boli hojnejšie v GO bunkách ako v non-GO bunkách (p<0,05).Expresia génov súvisiacich s autofágiou bola významne vyššia v tkanivách a bunkách GO ako v ich náprotivkoch bez GO.Interleukín-1p zvýšil LC3-II, p62 a Atg7 proteín v GO bunkách.Akumulácia autofagozómov sa ukázala na 4. deň adipogenézy a znížila sa na 10. deň spolu s tvorbou lipidových kvapiek.Expresia proteínov LC3 a p62 sa zvýšila do 48 hodín od diferenciácie a postupne sa znižovala od 4. do 10. dňa. Liečba bafilomycínom A1 a knockdown Atg5 pomocou shRNA inhibovali akumuláciu lipidových kvapiek a potlačili expresiu adipogénnych markerov. Autofágia bola zvýšená v GO tkanive a bunkách v porovnaní s non-GO tkaniva a buniek, čo naznačuje, že autofágia hrá úlohu v patogenéze GO.Manipulácia s autofágiou môže byť terapeutickým cieľom pre GO.