správy

Okolo nás je veľa neospevovaných hrdinov, ktorí sa zdajú byť obyčajní, no v skutočnosti nám potichu veľa prispievajú.Proteináza K je „neospevovaným hrdinom“ v priemysle molekulárnej diagnostiky, hoci v porovnaní s „veľkými a silnými“ v tomto odvetví je proteináza K taká nenápadná, že sme jej dôležitosť dlho prehliadali.S vypuknutím novej korunovej epidémie vzrástol dopyt po proteináze K a ponuka doma aj v zahraničí výrazne zaostáva za spotrebou a všetci si zrazu uvedomili, že proteináza K je taká dôležitá.
Aké je použitie proteinázy K
Proteináza K je serínová proteáza s aktivitou proteolytického enzýmu a môže si udržať aktivitu v širokom rozsahu prostredí (pH (4-12,5), tlmivý roztok s vysokým obsahom solí, vysoká teplota 70 °C atď.).Okrem toho aktivitu proteinázy K neinhibujú SDS, močovina, EDTA, guanidín hydrochlorid, guanidín izotiokyanát atď. a určité množstvo detergentu môže tiež zvýšiť aktivitu proteinázy K. Pri medikamentóznej liečbe (vírusová a mikrobiálna dezinfekcia ), potraviny (mäkčenie mäsa), koža (zmäkčovanie vlasov), výroba vína (čistenie alkoholu), príprava aminokyselín (degradované perie), extrakcia nukleových kyselín, hybridizácia in situ atď., proteináza K Existujú aplikácie.Najčastejšie používanou aplikáciou je extrakcia nukleových kyselín.
Proteináza K môže enzymolyzovať všetky druhy proteínov vo vzorke, vrátane tých histónov, ktoré sú pevne viazané na nukleové kyseliny, takže nukleové kyseliny sa môžu uvoľniť zo vzorky a uvoľniť do extraktu, čo uľahčuje ďalší krok extrakcie a purifikácie.Pri detekcii vírusovej nukleovej kyseliny je proteináza K jednou z dôležitých zložiek v roztoku na odber vzoriek vírusu.Proteináza K môže prasknúť a inaktivovať obalový proteín vírusu, čo je bezpečnejšie počas fázy transportu a detekcie;okrem toho proteináza K môže tiež degradovať RNázu, ktorá zabraňuje degradácii vírusovej RNA a uľahčuje detekciu nukleových kyselín.
Nočná sláva proteinázy K
Či už v oblasti vedeckého výskumu alebo v oblasti IVD, extrakcia nukleových kyselín je najzákladnejším experimentom, takže proteináza K bola vždy veľmi dôležitou existenciou.V minulosti však bola proteináza K oveľa menej známa ako jej úloha.Veľká časť z toho bola preto, že pomer ponuky a dopytu proteinázy K bol veľmi stabilný.Málokoho by napadlo, že zásobovanie proteinázou K bude problém.
S vypuknutím novej epidémie koruny vzrástol dopyt po testovaní nukleových kyselín.Ku koncu júna 2020 Čína dokončila takmer 90 miliónov nových testov koruniek a toto číslo je v celosvetovom meradle ešte alarmujúcejšie.V experimentoch extrakcie nukleových kyselín je pracovná koncentrácia proteinázy K približne 50-200 μg/ml.Vo všeobecnosti je na extrakciu vzorky nukleovej kyseliny potrebných asi 100 μg proteinázy K.Pri skutočnom použití, aby sa zvýšila účinnosť extrakcie nukleových kyselín, sa Proteináza K často používa vo zvýšenom množstve.Detekcia nukleových kyselín nového koronavírusu priniesla veľký dopyt po proteináze K.Pôvodná rovnováha ponuky a dopytu po proteináze K bola rýchlo narušená a proteináza K sa cez noc stala dôležitým materiálom na prevenciu epidémie.
Ťažkosti s produkciou proteinázy K
Aj keď s rozvojom epidémie si ľudia cenili dôležitú hodnotu proteinázy K, je zahanbujúce, že v dôsledku nadmerného low-key proteinázy K sa do výroby proteinázy K zapojilo len málo domácich firiem. chcú zaviesť produkciu proteinázy K Počas výrobného procesu sa zistilo, že proteináza K je mimoriadne špeciálny proteín.Je mimoriadne náročné rozšíriť produkčnú kapacitu proteinázy K v krátkom čase.
Produkcia proteinázy K vo veľkom meradle čelí nasledujúcim ťažkostiam
1. Nízky výraz
Proteináza K môže nešpecificky degradovať väčšinu proteínov a spôsobiť vážnu toxicitu pre expresnú hostiteľskú bunku.Preto je hladina expresie proteinázy K všeobecne veľmi nízka.Skríning expresných systémov a kmeňov, ktoré vysoko exprimujú proteinázu K, vo všeobecnosti vyžaduje dlhší cyklus.
2. Zvyšky pigmentov a nukleových kyselín
Fermentácia vo veľkom meradle zavádza veľké množstvo zvyškov pigmentu a hostiteľskej nukleovej kyseliny.Je ťažké odstrániť tieto nečistoty jednoduchým procesom čistenia a zložité čistenie zvyšuje náklady a znižuje rýchlosť regenerácie.
3. Nestabilita
Proteináza K nie je dostatočne stabilná, môže sa sama enzymolyzovať a je ťažké ju dlhodobo stabilne skladovať pri 37 °C bez ochranného činidla.
4. Ľahko sa vyzráža
Pri príprave lyofilizovaného prášku proteinázy K, aby sa zabezpečilo, že pevný obsah proteinázy K v lyofilizovanom prášku je veľký, je potrebné pridať lyofilizovaný ochranný prostriedok vo vysokej koncentrácii, ale keď koncentrácia proteinázy K dosahuje 20 mg/ml a viac, je ľahké. Agregácia tvorí zrazeninu, čo prináša veľké ťažkosti pri lyofilizácii proteinázy K s vysokým obsahom pevných látok.
5. Veľká investícia
Proteináza K má silnú proteázovú aktivitu a môže hydrolyzovať iné proteázy v laboratóriu.Preto proteináza K vyžaduje špecializované výrobné oblasti, vybavenie a personál pre výskum, vývoj a výrobu.
Roztok proteinázy K XD BIOCHEM
XD BIOCHEM has a mature protein expression and purification platform, and has rich experience in the expression and purification of recombinant proteins and optimization of production processes. Through the rapid formation of a research and development team, the large-scale production process of proteinase K has been overcome. The monthly output of freeze-dried powder is more than 30 KG. The product has stable performance, high enzyme specific activity, and no host cytochrome and nucleic acid residues. Welcome to contact XD BIOCHEM Obtain a trial package (E-mail: sales@xdbiochem.com Tel: +86 513 81163739).
Technické riešenia XD BIOCHEM zahŕňajú
Použitím integrácie plazmidov s viacerými kópiami sa vyberú kmene s vysokou expresiou s úrovňou expresie 8 g/l, čo prekonáva problém nízkej úrovne expresie proteinázy K;
Prostredníctvom zavedenia viacstupňového purifikačného procesu boli zvyšky hostiteľského cytochrómu a nukleovej kyseliny proteinázy K úspešne odstránené pod štandardnú hodnotu;
Prostredníctvom vysokovýkonného skríningu formulácií ochranného pufra sa vybral pufor, ktorý môže stabilne uchovávať proteinázu K pri 37 °C;
Skríningové tlmivé roztoky prekonávajú problém, že proteináza K sa ľahko agreguje a zráža pri vysokých koncentráciách, a kladie základ pre sušenie mrazom s vysokým obsahom pevných látok proteinázy K.

Vzorka XD BIOCHEM proteinázy K

XD BIOCHEM test stability proteinázy K: nedôjde k žiadnej významnej zmene aktivity po 80 dňoch pri izbovej teplote

XD BIOCHEM test stability proteinázy K: nedôjde k žiadnej významnej zmene aktivity po 80 dňoch pri izbovej teplote

Porovnanie účinku extrakcie nukleových kyselín XD BIOCHEM proteinázy K a konkurenčných produktov.V procese extrakcie nukleových kyselín sa používa XD BIOCHEM a kompetitívna proteináza K.Účinnosť extrakcie XD BIOCHEM proteinázy K je vyššia a hodnota Ct cieľového génu je nižšia.