Produkty

Podobne ako iné vírusy s pozitívnym vláknom RNA, tombusvírusy sa replikujú komplexom vírusovej replikázy viazanej na membránu (VRC).VRC pozostáva z p92 vírusom kódovanej RNA-dependentnej RNA polymerázy (RdRp), vírusového p33 RNA chaperónu a niekoľkých kooptovaných hostiteľských proteínov.Aby sa po svojej translácii stal funkčným RdRp, mal by byť replikačný proteín p92 začlenený do VRC, po čom by nasledovala jeho aktivácia.V teste založenom na bezbunkovom kvasinkovom extrakte sme už predtým ukázali, že aktivácia vírusu senzácie paradajok (TBSV) RdRp vyžaduje rozpustný hostiteľský faktor (faktory).V tomto článku identifikujeme bunkový proteín tepelného šoku 70 (Hsp70) ako kooptovaný hostiteľský faktor potrebný na aktiváciu N-koncovo skráteného rekombinantného TBSV RdRp.Okrem toho blokovanie funkcie Hsp70 založené na malých molekulách inhibuje syntézu RNA tombusvírusom RdRp in vitro.Ďalej sme ukázali, že neutrálne fosfolipidy, konkrétne fosfatidyletanolamín (PE) a fosfatidylcholín (PC), zvyšujú aktiváciu RdRp in vitro.Na rozdiel od toho fosfatidylglycerol (PG) vykazuje silný a dominantný inhibičný účinok na aktiváciu RdRp in vitro.Tiež demonštrujeme, že PE a PC stimulujú interakciu RdRp-vírus plus-vlákno RNA [(+)RNA], zatiaľ čo PG inhibuje väzbu vírusovej RNA na RdRp.Na základe stimulačnej verzus inhibičnej úlohy rôznych fosfolipidov pri aktivácii RdRp tombusvírusu navrhujeme, že lipidové zloženie cielených subcelulárnych membrán by mohli tombusvírusy využiť na reguláciu nového zostavovania VRC v priebehu infekcie. Vírusom kódovaná RNA-dependentná RNA polymeráza (RdRp), ktorý je zodpovedný za syntézu vírusového potomstva RNA v infikovaných bunkách niekoľkých vírusov RNA s pozitívnym vláknom, je spočiatku neaktívny.Táto stratégia pravdepodobne zabráni syntéze vírusovej RNA v cytosóle, ktorá by rýchlo viedla k indukcii bunkových antivírusových reakcií spúšťaných RNA.Počas zostavovania komplexu replikázy viazanej na membránu sa vírusový RdRp aktivuje prostredníctvom neúplne pochopeného procesu, vďaka ktorému je RdRp schopný syntézy RNA.Použitím TBSV RdRp sme ukázali, že kooptovaný bunkový chaperón Hsp70 a neutrálne fosfolipidy uľahčujú aktiváciu RdRp in vitro.Na rozdiel od toho má fosfatidylglycerol (PG) dominantný inhibičný účinok na aktiváciu RdRp in vitro a interakciu RdRp-vírusová RNA, čo naznačuje, že membránová mikrodoména obklopujúca RdRp výrazne ovplyvňuje jeho schopnosť syntézy RNA.Aktivácia vírusového RdRp teda pravdepodobne závisí od viacerých zložiek hostiteľa v infikovaných bunkách.